Определение локализации белков беременности в тканях человека Куликов Вячеслав Валерьевич
Диссертация - 15у.е., доставка 10 минут, круглосуточно, без выходных и праздников
Автореферат - 6 у.е., доставка 10 минут, круглосуточно, без выходных и праздников
Куликов Вячеслав Валерьевич. Определение локализации белков беременности в тканях человека : диссертация ... кандидата медицинских наук : 03.00.04 / Куликов Вячеслав Валерьевич; [Место защиты: ГОУВПО "Российский государственный медицинский университет"].- Москва, 2008.- 116 с.: ил.
Содержание к диссертации
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АГ - антиген AT - антитело АФП - альфа-фетопротеин АХ - аффинная хроматография БОФ - белки острой фазы НЬ - гаптоглобин
ГПХ (ГФ) - гель-проникающая хроматография (гель-фильтрация) ИХ - ионообменная хроматография ИФА - иммуноферментный анализ ИФО - иммуноферментное определение ИЭФ - иммуноэлектрофорез МГ - альфаг-макроглобулин ПААГ - полиакриламидный гель ПИЭФ - перекрестный иммуноэлектрофорез ПЛ - плацентарный лактоген РИД - радиальная иммунодиффузия РИФ - реакция иммунофлюоресценции СБАГ - связанный с беременностью альфа2-гликопротеин ТБГ - трофобластический бета-глобулин ТФ - трансферрин ФБ - фосфатный буфер ХГ - хорионический гонадотропин ЦП - церулоплазмин ЭФ - электрофорез
Введение к работе
Актуальность работы. Одной из главных целей реализации приоритетного национального проекта Российской Федерации в сфере здравоохранения является формирование предпосылок демографического роста в стране. Министерством здравоохранения РФ для реализации поставленной цели определены следующие основные задачи: улучшение репродуктивного здоровья населения и охрана здоровья матери и ребенка.
Среди важнейших методов диагностики как самой беременности, так и ряда патологических процессов, возникающих в период беременности, следует отметить количественный и качественный анализ маркеров беременности. К таким исследованиям относится определение гормонов и специфических белков беременности, а именно таких белков-маркеров как альфа-фетопротеин (АФП), связанный с беременностью альфа2-гликопротеин (СБАГ), трофобла-стический бета-глобулин (ТБГ). Эти белки беременности продолжают оставаться пристальным объектом научных исследовании, несмотря на их внедрение в практику как диагностикумов, что связано, прежде всего, с появлением новых методических подходов, позволяющих проводить тонкие исследования поведения и функции белковых молекул в организме [75; 77; 111].
Следует отметить, что в лабораторной диагностике используются также и постоянные белковые компоненты сыворотки крови, уровень которых повышается при беременности: альфа2-макроглобулин (МГ), трансферрин (ТФ), церу-лоплазмин (ЦП), гаптоглобин (ГГ) и другие. Все перечисленные белки крови относятся к белкам острой фазы.
Концентрация практически всех названных белков в биологических жидкостях характерно изменяется не только при физиологически протекающей беременности, но и при многих патологических состояниях, сопровождающих беременность, таких как ранние и поздние гестозы [17; 22; 36; 247], нефротиче-ский синдром [247], сахарный диабет [11; 206; 232], резус-несовместимость
[232], эклампсия, спонтанные и индуцированные аборты и внутриутробная гибель плода [10; 232; 247]. Изменение сывороточных концентраций белков-маркеров беременности может служить диагностическим подспорьем при многоплодии [10; 17] и переношенной беременности [17; 113]. Кроме того, уровень этих белков может служить косвенным ориентиром состояния плода [17].
Следует отметить, что белки первой группы (АФП, СБАГ и ТБГ) являются маркерами не только беременности [2; 86; 97; 141; 143], но и ряда онкологических заболеваний [9; 23; 36; 67; 85]. Кроме того, большинство вышеуказанных белков характерно изменяют свой уровень при многих воспалительных заболеваниях [35; 42; 100; 247; 221]. Доказана иммуносупрессивная и иммуно-модулирующая активность вышеуказанных белков [58; 91; 175].
Все вышеизложенное доказывает огромную физиологическую и патогенетическую роль белков, ассоциированных с беременностью. Вместе с тем многие вопросы их места синтеза и локализации в нормальных и малигнизиро-ванных тканях остаются не до конца изученными, несмотря на пристальное внимание исследователей к белкам беременности [49].
Поэтому приобретает важное не только теоретическое, но и клиническое значение знание места локализации и* синтеза наиболее значимых белков беременности с целью последующего использования их в диагностике и оценке эффективности лечения. Иными словами, для обоснованной корректировки го-меостаза организма.
В настоящее время ведущими методами в исследовании белков являются иммунохимические. Среди них известны иммуногистохимические методы, позволяющие выявить места локализации исследуемого белка в конкретной структуре органа или ткани. С помощью иммуногистохимии можно проводить скрининг-исследования в условиях поликлинической лаборатории для оценки состояния организма: в случае определения белков беременности - плода и матери.
Наиболее полно и достоверно определено место синтеза, локализации и накопления в субклеточных структурах при физиологическом и патодогиче-
ском течении беременности ТБГ [96; 103]. Установлено, что этот белок продуцируется и секретируется в кровь матери для выполнения своей основной функции - иммуносупрессивной. Сведения же по гистотопографии СБАГ отличаются большой разноречивостью как при беременности, так и при развитии заболеваний, сопровождащихся усилением синтеза этого белка.
Таким образом, совершенно закономерным и актуальным представляется детальное изучение белков беременности в органах и тканях в условиях нормы и патологии.
Цель исследования: Определение локализации и места синтеза белков беременности в тканях человека для уточнения представлений о молекулярных механизмах в условиях нормы и при канцерогенезе, а также для улучшения диагностики опухолей.
Задачи исследования:
Определить гистотопографию и количество общего белка в экзокриноци-тах исследуемых тканей в норме.
Сравнить гистотопографию и количество общего белка в малигнизирован-ных экзокриноцитах толстого кишечника и эндометрия.
Изучить гистотопографию белков беременности в тканях (печень, толстый кишечник, эндометрий) человека (мужчин и небеременных женщин) в норме, и в тканях рожениц (плацента).
Изучить гистотопографию белков беременности в тканях человека при канцерогенезе.
Сравнить гистотопографию белков беременности в нормальных и малиг-низировованных тканях.
Разработать принципы практического использования полученных результатов в лечении заболеваний женской половой сферы.
Научная новизна.
В ходе исследования впервые были получены новые данные о топографии суммарного белка с одновременным определением локализации белков беременности (СБАГ) в тех же тканях человека в физиологических условиях нормы и при онкопатологии.
Также впервые были получены количественные характеристики суммарного белка и СБАГ в норме и при канцерогенезе в некоторых тканях с помощью программно-аппаратного комплекса «Морфолог».
Полученные новые данные о динамике содержания и распределения как суммарного белка в тканях, так и иммуногистохимического исследования СБАГ в аналогичных участках организма позволят сделать рекомендации для практического здравоохранения с целью наиболее ранней диагностики предбо-лезни.
Научно-практическая значимость работы
На основе результатов исследования сформированы рекомендации для практического здравоохранения по иммунофлюоресцентному анализу опухолевых тканей эндометрия и толстого кишечника по выявлению определенного антигена. Полученные результаты позволяют рекомендовать этот анализ как лабораторный тест для ранней диагностики опухолей.
Выносимые на защиту положения
Содержание общего белка в неизмененных тканях эндометрия, толстого кишечника, плаценты, аппендикса и печени по данным углубленных цитофотометрических исследований существенно различается.
В малигнизированных тканях эндометрия и толстого кишечника его количество существенно возрастает соответственно для эндометрия 231,23 в норме и 314,02 усл.ед. при аденокарциноме; для толстого кишечника 174,07 в норме и 347,05 усл.ед при аденокарциноме.
Наибольшие концентрации СБАГ в различных тканях по степени убывания выявляются в малигнизированных тканях толстого кишечника, эндометрия и в нормальной плаценте рожениц.
Выявленное увеличение содержания СБАГ в плаценте и малигнизированных тканях, вероятно, связано с разной степенью дерепрес-сии структурного гена СБАГ, реализующего иммуносупрессивную активность в большей степени при беременности и опухолях.
Внедрение результатов в практику
Выявление СБАГ в гистологических препаратах может быть использовано для диагностики в гинекологической практике для оценки состояния эндометрия и проктологии в качестве дополнительного критерия степени малигни-зации исследуемых тканей.
Материалы работы были доложены на научных региональных и международных форумах.
Материалы диссертации доложены на заседаниях кафедры биологической химии с курсом клинической лабораторной диагностики и конференциях ГОУ ВПО АГМА, на международных научных конференциях молодых ученых «Белки - маркеры патологических состояний» (Астрахань - Москва, 1999, 2003гг.), на научно-практической конференции молодых учёных с международным участием «Современные достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины» (Астрахань-Москва, 2004г.), были представлены на XXVIII Meeting of the international society for oncodevelopmental biology and medicine (ISOBM) (Мюнхен, Германия, 2000 и Хельсинки).
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1 БИОЛОГИЧЕСКАЯ РОЛЬ БЕЛКОВ БЕРЕМЕННОСТИ
1.1.1 ПРОДУКЦИЯ БЕЛКОВ БЕРЕМЕННОСТИ ПРИ ФИЗИОЛОГИЧЕСКИ ПРОТЕКАЮЩЕЙ БЕРЕМЕННОСТИ
Спектр сывороточных белков у беременных женщин значительно отлича
ется от такового у небеременных. Ещё в начале 20-го века в 1903 г. Zangemeister
[255] описал увеличение глобулярных фракций при нормальной беременности.
В течение последующих десятилетий многими авторами были показаны коли
чественные изменения в профиле сывороточных белков при беременности.
"' Удобнее всего рассматривать эти изменения, основываясь на классифи-
кации сывороточных белков по их электрофоретической подвижности.
Longsworth L.G. et al., в 1945 г. [172] изучали белковый спектр сыворот
ки крови при нормально протекающей беременности методом свободного элек
трофореза. При этом они не только подтвердили полученные ранее данные об
уменьшении уровня альбуминов и увеличении уровня глобулинов, но и выяс
нили, что увеличение глобулинов происходит за счет альфа- и бета-глобулинов,
^ в то время как количество гамма- глобулинов не изменялось. Эти данные позд-
нее были подтверждены многими исследователями [7; 196; 251].
Следует отметить, что многочисленные литературные данные об изменении уровня различных фракций глобулинов при беременности, неоднозначны, а зачастую и противоречат друг другу.
Так, Longsworth L.G. et al. [172], Pozzi P.C. [203] считали, что альфа- и бета- глобулины увеличиваются в одинаковой степени.
Boselli A et al. [95], Bayer Н. [80], Smith Е. et al. [216], напротив, нашли, что бета-глобулины увеличиваются в большей степени, чем альфа-глобулины.
Вурманн Ф., Лийвранд В.Э. [31], De Alvarez R.R. et al. [108], напротив, показали, что альфа-глобулины увеличиваются в большей степени, чем бета-глобулины.
Имеются данные о равноценном повышении уровня всех фракций глобулинов при беременности [21; 201].
По сведениям Roszkowsky I. [208], Alvarez-Pita С.[72], Wirken Н. et al. [251], при беременности, наряду с повышением уровня альфа- и бета-глобулинов, происходит одновременное падение уровня гамма-глобулинов.
Отличаются также данные различных авторов относительно динамики уровней фракций глобулинов на протяжении беременности.
Fakhri О. [ПО] и Mac Gillivray Let al. [178] утверждают, что содержание альфаі- , альфа2- и бета-глобулиновувеличивается постепенно, по мере развития беременности, а содержание гамма-глобулинов - снижается до 2-го триместра беременности и в дальнейшем, до конца беременности, не изменяется.
По данным Лийвранд В.З. [31], уровень альфа- и бета-глобулинов увеличивается в течение всей беременности (колебания же гамма-глобулинов незначительны). Причем содержание альфа-глобулинов возрастает постепенно, с начала беременности до 8-го лунного месяца, чуть заметно снижаясь на 9-Ю лунных месяцах.
Имеются сведения, что содержание альфа2-глобулинов в первые три месяца беременности повышается, на 4-5 месяцах слегка падает и, начиная с 6-го месяца, увеличивается с каждым месяцем беременности [47; 46].
В периоде родов уровень глобулиновых фракций крови не претерпевает значительных изменений по сравнению с таковым в конце беременности [31; 208].
В послеродовом периоде содержание альфа!-, альфа2- и бета-глобулинов постепенно снижается, в то время как содержание гамма-глобулинов слегка повышается [7; 31].
К хорошо изученным белкам, повышающим свой уровень при беременности, относятся: альфаг-макроглобулин, гаптоглобин, церулоплазмин (все -
зона альфа-глобулинов) и трансферрин (зона бета-глобулинов) [30]. Сам факт количественных отличий в спектрах сывороточных белков крови беременных и небеременных имеет, безусловно, большое значение в биологии и медицине.
В 1959 году Smithies [219], методом электрофореза на крахмальном геле в зоне альфа2-глобулинов обнаружил дополнительную фракцию, которая отсутствовала у небеременных. Smithies назвал эту фракцию зоной беременности [219]. Частота выявления этой зоны увеличивалась по мере увеличения срока беременности [69]. "Зона беременности" не была выявлена ни у одного здорового мужчины и у здоровой небеременной женщины.
В дальнейшем многие авторы подтвердили наличие белковой фракции в сыворотке крови, специфичной для беременности [50; 89; 140; 162].
В результате дальнейшего изучения "зоны беременности" методом им-муноэлектрофореза в агаре, удалось идентифицировать в ее составе до пяти антигенных компонентов [50; 79; 89; 140; 143; 162].
В 1959 году Мс Laren S.A. et al. [179] получили антисыворотку против сыворотки крови здоровых беременных женщин. С помощью этой антисыворотки была обнаружена дополнительная полоса преципитации (при иммуно-диффузии в агаровом геле), которая отсутствовала в сыворотке у небеременных.
В 1966 году Bayer Н. [81], применяя метод диффузии в агаре по Оухтер-лони и иммуноэлектрофорез с использованием различных антисывороток, обнаружили в сыворотке крови беременных женщин два антигенных компонента, не обнаруживаемых в сыворотке крови небеременных.
Bohn Н., в 1971 году [89] исследовал сыворотку крови беременных женщин методом электрофореза в полиакриламидном геле. При этом было обнаружено четыре белка, характерных для беременности.
Аналогичные находки были сделаны и другими авторами [19; 54; 55; 91]. Следует отметить, что "белки беременности" отсутствуют, или находятся в очень малых количествах в сыворотке крови небеременных женщин и здоровых мужчин [4; 19; 54; 55; 100].
По данным Воробьевой Т.Б., "белки беременности" подразделяются на три группы, в соответствии с происхождением:
Белки сыворотки крови, концентрация которых резко возрастает во время беременности.
Трофобластические белки.
Белки, продуцируемые эмбрионом [17].
К первой группе принадлежат, например, комплементарный к стероидам бета-глобулин (SP2), связанный с беременностью альфа2-гликопротеин (сс2-PAG), плацентарные белки РР1, РР2, РРЗ, РР4, РРб и РР7.
К белкам, специфическим для плаценты, принадлежат: плацентарный лактоген человека, плацентарная щелочная фосфатаза, связанные с беременностью белки плазмы РАРР-А и РАРР-С, трофобластический бета-гликопротеин, плацентарный белок РР5 [94].
И, наконец, примером эмбриоспецифических белков могут служить альфа-фетопротеин, эмбриоспецифический бета 1-глобулин и эмбриональный бета2-глобулин.
Из вышеуказанных белков наибольший интерес для теоретической и практической медицины представляют альфа-фетопротеин, хорионический го-надотропин, связанный с беременностью альфаг-гликопротеин и трофобластический бета-глобулин.
Альфа2-макроглобулин
Альфа2-макроглобулин (МГ) является одним из важнейших ингибиторов протеиназ, регулирующим активность различных протеолитических ферментов крови и тканей [13; 14; 122; 123; 135].
О существовании особого ингибитора протеиназ стало известно еще в начале 60-х годов, когда Веремеенко и Белицер [15] обнаружили, что трипсин в присутствии избытка ингибиторов сыворотки крови сохраняет способность расщеплять низкомолекулярные синтетические субстраты, но не гидролизует высокомолекулярные белки.
Исследования Веремеенко К.Н. и Белицер В. в 1963 году [12] показали, что трипсин в присутствии избытка ингибиторов сыворотки крови активно расщепляет протамин и становится необычно термостабильным. В результате клинических исследований было установлено, что в альфа2-глобулиновой фракции существует специальный белок, который образует комплекс с трипсином, интенсивно гидролизующий протамин [119; 120].
Веремеенко К.Н. и Кизим А.И. [15] назвали этот белок ингибитором 1, в отличие от ингибитора 2, который инактивирует фермент полностью.
Позднее Ходорова Е.Л. и соавт. [60], Mehl I.W. et al. [183] и др. выделили из сыворотки крови человека ингибитор 1, мигрирующий при электрофорезе в зоне альфа2-глобулинов.
Дальнейшие исследования показали полную идентичность ингибитора 1, трипсинпротеинэстеразы, 19S альфа2-гликопротеида и альфа2-макроглобулина [8; 61; 183].
Содержание альфа2-макроглобулина в плазме крови взрослых людей составляет 2,6 - 3,3 г/л [155; 168; 247] и с возрастом изменяется мало.
Примерно на десятой неделе внутриутробного развития уровень альфа2-макроглобулина в сыворотке крови достигает 15% от уровня взрослого и постепенно повышается до нормальных (для взрослого) значений. Максимальный уровень отмечается к 1 - 3 годам (примерно 4,5 г/л), затем постепенно снижается до стабилизации на уровне, характерном для взрослых к 25 годам [115].
Концентрация альфа2-макроглобулина у женщин примерно на 20% выше, чем у мужчин [249; 131]. Его концентрация в сыворотке крови экспоненциально возрастает в течение беременности, достигая максимума в третьем триместре. Очевидно, это связано с положительным влиянием эстрогенов на синтез альфа2-макроглобулина [68; 83; 158; 161]. Влияние уровня эстрогенов на синтез альфа2-макроглобулина доказывает и тот факт, что концентрация белка в плазме крови резко возрастает при приеме ряда гормональных контрацептивов [23; 190].
Альфа2-макроглобулин содержится также в лимфе, сперме, экссудатах [189].
В настоящее время основными методами идентификации альфа2-макроглобулина в биологических жидкостях являются иммунологические методы [133; 135; 236; 12], основанные на применении специфических антисывороток.
Связанный с беременностью альфа2-гликопротеин
Связанный с беременностью альфа2-гликопротеин (СБАГ) был обнаружен в 1959 году Smithies et Maclaren [219] при электрофоретическом разделении в крахмальном геле сыворотки крови беременных женщин.
В том же году, при иммуноэлектрофоретическом разделении сыворотки крови беременных женщин, было выявлено два специфических для сыворотки крови беременных женщин компонента, один из которых имел подвижность альфа2-глобулинов [197].
Никулина Д.М. [37] указывает, что в дальнейшем данная фракция белков изучалась довольно интенсивно. Начиная с 1970 года различными авторами было описано более десяти белков, сходных со СБАГ, среди них: pregnansy zone protein (PZP), pregnansy associated globulin (PAG) [180], pregnansy associated alfa2-glycoprotein (alfa2-PAG) [141; 143; 145], pregnansy protein [158], pregnansy alfa2-globulin [162; 182], альфа2-глобулин [53; 33], Schwangerschaftassociierte-proteine (SP3) [89], pregnoglobulin [82], new serum
alfa2-macroglobulin [227], ассоциированный с беременностью альфа2-гликопротеин (АБГ) [29].
В дальнейшем методами иммунохимической идентификации было доказано, что все вышеуказанные белки являются абсолютно идентичными [83; 129; 187; 158; 154; 76].
Во избежание затруднений, связанных с обилием названий, в 1975 году, международная группа экспертов (Beme В.Н., Hofmann R., Klausch В., Straube W., Kasukawa, Stimson W.H., Bohn H., Home C.H.W., Rittner Ch., Than G.N.) рекомендовала называть данный белок: pregnancy associated alfa2-glycoprotein (a2-PAG), что в переводе на русский означает: связанный с беременностью альфа2-гликопротеин (СБАГ).
Благодаря исследованиям Bundschuh С. [97], Hofmann R. et al. [144; 147], Wilken H. [250], Kuczynski ЦІ65], было показано, что СБАГ появляется в сыворотке крови беременных женщин, начиная с 6-10 недели беременности, и затем его концентрация экспоненциально возрастает в течение беременности и становится максимальной к концу беременности (0,5-2,0 г/л).
После родов уровень СБАГ быстро падает (период полураспада - 6-7 дней), возвращаясь к нормальным для небеременных женщин величинам через 6-8 недель после родов [54; 92; 238].
В 1970 году Татаринов Ю.С. и соавт. [53] опровергли доминирующее в то время мнение об отсутствии СБАГ в сыворотке крови небеременных женщин и мужчин. Был применен метод радиальной иммунодиффузии по Оухтер-лони в модификации Храмковой Н.И. и Абелева Г.И. [62], в результате было показано, что СБАГ находится в малом количестве (0,5-2,0 мг%) в сыворотке крови доноров женщин (частота выявления - 50,8%) и мужчин (24,6%), в то время как в сыворотке крови рожениц уровень СБАГ достигает 128 мг% (частота выявления - 100%). Впоследствии данные Татаринова Ю.С. и соавт. были подтверждены многими авторами [52; 91; 149; 162; 180].
У взрослых концентрация СБАГ в сыворотке крови варьирует от 0,1 до 60 мг/л [27]. Установлено, что она повышается пропорционально возрасту.
Уровень этого белка в 2-5 раз больше у женщин, чем у мужчин соответствующего возраста [27]. Предполагается, что это обусловлено стимулирующим действием эстрогенов [149; 27].
Уровень СБАГ в сыворотке крови колеблется на протяжении менструального цикла [41].
Уменьшение концентрации СБАГ в сыворотке крови отмечено при многих аутоиммунных заболеваниях [5; 147; 160].
Straube W. et al. [232] выявили повышение уровня СБАГ в сыворотке крови беременных женщин, больных сахарным диабетом и при резус-конфликте.
Трофобластический бета-глобулин
Среди белков "зоны беременности", синтезируемых трофобластом, большое значение имеет трофобластический бета-глобулин (ТБГ).
В 1958 году Olivetty и Ruggert, изучая сыворотку крови здоровых беременных женщин методом иммунодиффузии в геле, с помощью антиплацентарной сыворотки, выявили белок, который исчезал через несколько дней после родов. В 1960 году Hirschfeld I. et al. [140] определили антигенный компонент с подвижностью бета 1-глобулинов, который отсутствовал в сыворотке крови небеременных женщин и мужчин.
Позднее подобные результаты были описаны Bayer Н. [79] и Азявчиком А.В. и соавт. [3]
В 1970 году Татаринов Ю.С. и Масюкевич В.Н. [51] сообщили об открытии нового бета 1-глобулина "зоны беременности". В то же время белки со сходными физико-химическими свойствами обнаружили Kuczynski I. [162], Hofmann R. [134; 141; 143], Bohn H. [89], Schulze-Mosgan H. [246], Lin [170]. Позднее было доказано, что вышеуказанные протеины идентичны.
Подробное и убедительное описание ТБГ, его физико-химических свойств и клинического значения дали Татаринов Ю.С, Никулина Д.М. и Мес-нянкина Н.В. [36; 51; 56; 57].
ТБГ имеет ряд синонимов, наиболее распространенные из них: Pregnancy-associated plasma protein С (PAPP-C), Trophoblast specific betal-globulin (TSG), Pregnancy specific betal-globulin (PSJ3G), Schwangerschaft-associierte betal-glicoproteine (SP1) [89].
ТБГ постоянно выявляется в больших количествах в плацентарной ткани и в сыворотке крови беременных женщин, начиная с ранних сроков беременности [40; 52; 70; 78; 91; 102; 113]. Следует отметить, что из всех белков "зоны беременности", ТБГ имеет самую высокую концентрацию в сыворотке крови (в конце беременности).
С конца первого триместра беременности ТБГ определяется также в околоплодных водах. В первые 4 суток послеродового периода ТБГ выявляется в грудном молоке и в слизи из цервикального канала [86; 91; 173; 228]. ТБГ отсутствует в тканях и в сыворотке крови доноров.
По данным Татаринова Ю.С. и соавт. [55] ТБГ обнаруживается в пупо-винной сыворотке в 8-10% случаев. Татаринов Ю.С [55], Никулина Д.М. [36] и Воробьева Т.Е.[17] предполагают, что ТБГ попадает в кровь плода вследствие нарушения целостности плацентарного барьера.
В сыворотке крови беременных женщин ТБГ выявляется методом им-мунодиффузии на 2-3 неделе беременности и до родов [40; 70; 86]. В начале беременности процент выявления данного белка небольшой (между 8 и 16 неделями беременности его концентрация составляет 1 мг%), но с течением беременности уровень ТБГ возрастает и достигает максимума к 34-38 неделям беременности (процент выявления - 70-100%), когда он составляет 5-20 мг% [5; 36; 43; 51; 78; 209]. Далее, к моменту родов, концентрация ТБГ падает в 3-8 раз [37; 43].
В течение 5 дней после родов ТБГ исчезает из материнской крови полностью, так как период его полураспада равен 17-45 часам [39; 36; 52; 71]. Динамика изменения концентрации ТБГ в течение беременности в плацентарной ткани и в амниотической жидкости аналогична таковой в сыворотке крови беременных женщин [36; 39; 59; 63; 228].
С конца первого триместра беременности ТБГ выявляется в моче [36; 86; 173]; его концентрация составляет 2,3% от уровня белка в сыворотке крови и резко повышается к 34-38 неделям, достигая 3 мг% [39; 86; 173].
Существует иммунологическое отличие ТБГ мочи и ТБГ сыворотки крови. Гель-диффузионный тест, ТБГ мочи дает с ТБГ сыворотки крови феномен неполной иммунологической идентичности ("феномен шпоры") [36; 86; 91; 173]. Электрофоретическая подвижность в агаре ТБГ мочи и ТБГ сыворотки крови практически одинакова, но при электрофорезе в ПААГ, ТБГ мочи движется значительно быстрее и выявляется в зоне трансферрина. Bohn Н. [89] считает, что ТБГ мочи и сывороточный ТБГ имеют одинаковый заряд, но уро-ТБГ имеет меньшую молекулярную массу за счет потери части антигенных детерминант.
По мнению Никулиной Д.М. [36], иммунохимические и физико-химические различия между ТБГ мочи и крови обусловлены тем, что в мочу, в связи с нарушениями проницаемости почечного барьера, при ряде патологических состояний (поздние гестозы), проникает только меньшая субъединица ТБГ.
В 1976 году Татаринов Ю.С., Никулина Д.М. и Меснянкина Н.В. разработали иммунохимический тест на ТБГ для:
диагностики ранних сроков беременности
дифферинциальной диагностики гравидарного состояния и патологии женской половой сферы, не имеющей отношения к беременности
оценки тяжести поздних токсикозов.
1.1.2. ПРОДУКЦИЯ ББ ПРИ ПАТОЛОГИИ БЕРЕМЕННОСТИ
МГ, СБАГ и ТБГ изучались многими авторами как потенциальные маркеры осложненных вариантов течения беременности и гинекологических заболеваний. Ежегодно в мире появляются десятки публикаций, в которых содержится новая информация об их роли в регуляции репродуктивной функции.
Доказано, что для нефротического синдрома характерно увеличение концентрации МГ в сыворотке крови, которое имеет пассивный характер и поэтому коррелирует с уровнем протеинурии [234; 229].
У пациенток с послеродовым эндометритом, начиная с 1-х суток, выявлялось низкое содержание МГ в течение всего периода наблюдения. Концентрация этого белка у родильниц с осложненным течением послеоперационного периода была также сниженной, по сравнению с контрольной группой, однако незначительно отличалось от таковой у родильниц. Стойкая депрессия уровня МГ в сыворотке крови, характерная для послеродового сепсиса и перитонита, является одним из критериев генерализации инфекционного процесса [254]. При локализованных формах гнойно-септических заболеваний концентрация МГ повышалась в начале лечения, снижалась в период манифестации симптомов и нормализовалась только по мере редукции воспаления [254]. При мастите колебания его сывороточного уровня были менее выраженными, чем при эндометрите.
Не исключено, что удаление из циркуляции таких мощных иммуносу-прессоров как МГ и СБАГ приводит к усилению ответа иммунной системы матери на инфекционный процесс [153; 156; 159].
При инсулинзависимом диабете у беременных концентрация МГ в сыворотке крови имеет тенденцию к снижению, а при гипертензии она, напротив, возрастает [171; 246].
Компенсаторные реакции, типичные для сахарного диабета, могут быть прослежены на субклеточном и клеточном уровне в виде повышения функциональной активности синцитиотрофобласта [20]. В результате нередко усиливается продукция эстрогенов, которые относятся к стимуляторам синтеза СБАГ [109]. Возможно поэтому его концентрация в сыворотке крови матерей, страдающих сахарным диабетом, часто бывает повышенной, причем после 24 недели определяется её отчетливый градиентный рост [234]. Если во II половине беременности на фоне данного заболевания развивается пролиферативная ретинопатия, то наблюдается отчетливое снижение уровня СБАГ [234], а при её
молниеносной форме он часто ниже 150мкг/мл [98]. Депрессия уровня СБАГ у части больных предшествовала появлению клинических симптомов. Следовательно, можно использовать в качестве маркера микроциркуляторных нарушений при декомпенсации сахарного диабета у беременных.
Выявлено некоторое снижение СБАГ при поздних токсикозах, причем оно было пропорционально их тяжести [234; 98]. Снижение концентрации СБАГ в сыворотке крови может нивелироваться нарастающей гиповолемией, которая играет важную роль в патогенезе эклампсии. Поэтому при тяжелых формах гестоза его уровень у некоторых пациентов мало отличался от такового при неосложненном течении беременности [255].
Отмечается снижение содержания СБАГ и ТБГ в сыворотке крови в III триместре беременности у носительниц патогенной и условно-патогенной флоры в цервикальном канале [188]. В среднем, уровень СБАГ у этих женщин более, чем в 2 раза ниже, чем у беременных, у которых идентифицировались лишь непатогенные штаммы. Предполагается, что ограничение биосинтеза данных иммуносупрессоров направлено на создание более оптимальных условий для активации распознавания потенциально опасных штаммов иммуноком-петентными клетками и их дальнейшей селективной элиминации.
Достаточно сложно объяснить изменение концентрации СБАГ при резус-конфликте. Легкой форме гемолитической болезни новорожденных сопутствовало нормальное содержание СБАГ, ТБГ, IgG, IgA и IgM в сыворотке крови матери. Гибели новорожденных в течение первых 3-х суток после родов предшествовала депрессия уровней СБАГ и IgG в сочетании с высокой продукцией ТБГ в III триместре. В то же время снижение концентрации СБАГ на фоне нормального содержания ТБГ и иммуноглобулинов в течение всей беременности часто наблюдалось при беременности резус-изосенсибилизированной женщины резус-отрицательным плодом. Эти показатели имели более высокую прогностическую ценность, чем титр противорезусных антител у беременных, который совершенно не зависел от тяжести гемолитической болезни новорожденных [16; 6].
9?
Явное увеличение сывороточного содержания СБАГ наблюдалось у девушек при дефиците соматотропного гормона [112]. Кортикостероидная терапия в I половине беременности вызывала некоторую депрессию его уровня. В обзоре Munck Petersen С. [188] приведены убедительные доказательства отсутствия прямого стимулирующего воздействия гормонов на содержание МГ и СБАГ в сыворотке крови. Скорее всего, эстрогены, гестагены и другие гормоны относятся к слабым вторичным модуляторам метаболизма этих белков.
1.2. СОВРЕМЕННЫЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЯ О МИШЕНЯХ БЕЛКОВ
БЕРЕМЕННОСТИ
Более 20 лет назад установлено, что около половины экзогенных комплексов МГ с протеиназами выводится из кровеносного русла человека в течение 5-6 минут, тогда как радиоактивно меченный нативный белок может находиться в нем до нескольких суток [195]. Затем был обнаружен ассоциированный с цитоплазматической мембраной рецептор, который связывает МГ, его аналоги у животных и СБАГ. Его важнейшие характеристики подробно описаны в обзоре С. Munck Petersen [188]. В последние годы появилось огромное количество публикаций о рецепторе МГ (РМГ). Наиболее распространенное его название a2-macroglobulin receptor/low density lipoprotein receptor-related protein. Участвуя в элиминации липопротеинов низкой плотности (ЛНП), их липазы, многих других белков, он играет немаловажную роль в патогенезе атеросклероза, болезни Альцгеймера и ряда других часто встречающихся заболеваний. РМГ экспрессирован, главным образом, на клетках-продуцентах МГ, т.е. на гепатоцитах, макрофагах и фибробластах. Связавшиеся с рецептором белки в считанные минуты поглощаются клетками и подвергаются расщеплению.
Альфа.2 макроглобулин
Оказалось, что РМГ в структурном, функциональном и антигеном отношениях не отличим от идентифицированного позже мембранного протеина,
родственного рецептору липопротеинов низкой плотности (lipoprotein receptor-related protein). Обнаружена высокая степень гомологии между РМГ и рядом доменов самого рецептора ЛГШ (РЛНП). Возможно, что в ходе эволюции ген РЛНП образовался в результате частичной делеции и дупликации гена РМГ [139].
Наряду с эпителиальным гликопротеином (gp), имеющим молекулярную массу ЗОО-ЗЗОкДА, РМГ участвует в поглощении клетками и последующей деградации широкого спектра функционально различных лигандов, включая липопротеины, протеиназы, а также комплексы последних с ингибиторами, например, комплексы al-антитрипсин-эластаза нейтрофилов, al-анти-химотрипсин-катепсин G, антитромбин Ш-тромбин, al-антитрипсин -трипсин [239; 240].
К антагонистам РМГ относится ассоциированный с рецептором протеин (receptor-associated protein, РАП), имеющий молекулярную массу 39кДа и состоящий из 323 аминокислотных остатков. Другое его менее распространенное название - гепарин связывающий протеин-44.
РАП способен формировать комплексы с тяжелой и легкой цепями РМГ. Он ингибирует связывание всех известных лигандов с РМГ, РЛНП и упоминавшемся выше эпителиальным гликопротеином (gp). Кроме того, РАП в комплексе с глутатион S-трансферазой блокирует эндоцитоз хиломикронов печенью [186].
В нормальных артериях человека мРНК РМГ определяется методом гибридизации in situ в гладкомышечных клетках и в фибробластах адвентиции. Эндотелиальные клетки также ее содержат, но с помощью иммунохимических методов рецептор в них обнаружить не удалось. При атеросклеротическом поражении сосудов повышенный уровень экспрессии мРНК наблюдается в гладкомышечных и "пенистых" клетках, а также в макрофагах, нагруженных липи-дами [177]. "Пенистые" клетки, образующиеся из гладкомышечных клеток и макрофагов, имеют 3 типа рецепторов: РМГ, "рецептор-мусорщик" (scavenger
receptor, РМ) и РЛНП. Высокий уровень мРНК РМГ обнаружен в гладкомышечных клетках и макрофагах на ранних и поздних стадиях атеросклероза аорты человека, тогда как мРНК РМ экспрессирована в патологически измененных макрофагах, но не обнаруживается в поврежденных гладкомышечных клетках. РЛНП отсутствовал в зоне поражения, но определялся в гладкомышечных клетках на границе со здоровой тканью. Следовательно, РМГ, наряду с РМ, играет важную роль в развитии атеросклеротических изменений сосудов у человека [176]. Кроме того, связывание им активаторов плазминогена урокиназного и тканевого типов может снижать фибринолитический потенциал крови и ин-гибировать рассасывание тромбов на атеросклеротических бляшках.
Превращение моноцитов в макрофаги, а также инкубация последних с ацетилированными липопротеинами низкой плотности приводит к увеличению экспрессии мРНК РМГ. Активация транскрипции гена РМГ наблюдается при обработке гладкомышечных клеток сосудов некоторыми эпидермальными и тромбоцитарными факторами роста.
По данным проточной цитофлюорометрии РМГ определяется на мембранах моноцитов на ранних стадиях их созревания и является маркером некоторых форм хронического лейкоза. Поэтому его относят к антигенам диффе-ренцировки этих клеток.
Иммуногистохимическое исследование 107 меланом человека показало, что при прогрессировании опухоли содержание в ней РМГ и РАП заметно снижается. В большинстве случаев отмечалось значительное сходство распределений этих белков в опухолевой ткани. С помощью проточной фитофлюоромет-рии установлено, что экспрессия РМГ на цитоплазматической мембране клеток меланом резко снижается в присутствии активатора плазминогена урокиназного типа, который в больших количествах продуцируют клеточные линии с высокой способностью к метастазированию. В этих клетках определяется высокий уровень экспрессии мРНК РМГ, тогда как выраженность экспрессии мРНК РАП была примерно одинаковой во всех культурах.
В тканях низкодифференцированного рака молочной железы РМГ определяется иммуногистохимически только в макрофагах и фибробластах, но не в самих опухолевых клетках.
Связанный с беременностью альфа2 гликопротеин
После внутривенной инъекции крысам комплексов меченного Iіь человеческого СБАГ с химотрипсином период их полувыведения из кровотока равняется 2,3 минуты. Через 6 минут около 67% изотопа определяется в печени и только 3% в селезенке, как у самцов, так и у беременных самок. Его аккумуляция в других органах и в плаценте была крайне незначительная. Период полувыведения нативного СБАГ превышает 30 минут. Комплексы СБАГ-химотрипсин специфически поглощаются in vitro крысиными гепатоцитами и адипоцитами, а также человеческими фибробластами, гепатоцитами и моноцитами-макрофагами даже при 4С. Комплексы МГ-трипсин полностью блокируют связывание модифицированного СБАГ с этими клетками. Приведенные факты свидетельствуют о наличии мембранных рецепторов, общих для обоих белков.
Нативный СБАГ обнаруживает сродство к достаточно крупному белку нейтрофилов (105кДа), но его другие формы с ним не взаимодействуют. По-видимому, этот протеин является ассоциированной с мембраной протеиназой. Комплекс СБАГ с ПЛ в условиях иммуноблотинга связывался с достаточно крупным белком тромбоцитов. Это позволяет предположить наличие нескольких рецепторов для различных форм макроглобулинов в составе мембран клеток крови.
Влияние макроглобулинов на функциональное состояние мононуклеар-ных клеток (МНК) изучалось многими исследователями. Ещё в 1976 году Gout-ner А. и его коллеги обнаружили значительное подавление пролиферации лимфоцитов, индуцированной антигенами, экзогенным нативным МГ (0,04-0,6г/л).
Уже давно известно, что СБАГ способен резко подавлять пролиферацию лимфоцитов, индуцированную лектинами, а также ответ в СКЛ. Наиболее
сильный ингибиторный эффект этого макроглобулина наблюдался при его концентрации в культуре 150-400мкг/мл, и он не усиливался при дальнейшем её увеличении. Его иммуносупрессивная активность была значительно выше, чем таковая у ТБГ, АФП, ХГЧ и плацентарного лактогена.
Замечено, что он более резко угнетает пролиферацию Т-лимфоцитов, чем Т-зависимую пролиферацию В-клеток. Снижение его ингибирующего эффекта также прогрессировало пропорционально сроку беременности и не зависело от характера стимуляции клеток.
СБАГ ингибирует фагоцитоз кишечных палочек нейтрофилами и элек-трофоретическую подвижность макрофагов, однако, влияет ли это на индукцию иммунного ответа пока не известно.
1.3 БЕЛКИ БЕРЕМЕННОСТИ КАК ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ТЕСТЫ ПРИ ЗАБОЛЕВАНИЯХ ЧЕЛОВЕКА
Патологические изменения концентрации МГ, СБАГ и ТБГ в сыворотке крови наблюдаются при многих заболеваниях человека. Интерес к данным белкам вызван наличием у них определенной иммуномодулирующей активности, способности воздействовать на метаболизм цитокинов, а также других уникальных биологических свойств. Показано, что они играют важную роль в патогенез ряда синдромов и, нередко, проявляют себя как маркеры некоторых патологических состояний.
Альфа2-макроглобулин
Диагностическое значение альфа2-макроглобулина довольно высоко. Снижение концентрации белка в сыворотке крови отмечается многими авторами при остром панкреатите, вирусном гепатите, ревматическом остеоартрозе, на ранних стадиях ожоговой болезни [31; 39; 98; 160; 212].
Увеличение концентрации альфа2-макроглобулина в сыворотке крови отмечается при большинстве острых воспалительных заболеваний [104; 106;
107]. Значительное повышение уровня альфа2-макроглобулина в плазме крови отмечается у нефротических больных, а также у больных при ранних отторжениях трансплантата [247]. У больных сахарным диабетом обнаружены высокие концентрации белка, особенно при нарушении функции почек [11; 206].
Установлена прямая корреляция между увеличением уровня белка и ме-тастазированием опухоли [67].
Наряду с диагностическим значением, в последнее время изучается возможность применения альфа2-макроглобулина в качестве терапевтического средства. В ряде работ [34; 44; 45; 64; 220; 132] указывается на значительное облегчение течения лучевой болезни при введении животным этого белка. Внутривенное введение альфа2-макроглобулина животным, подвергшимся воздействию летальной ионизирующей радиации летальной дозы, нормализовало синтез РНК и ДНК в костном мозге и лимфоидных органах, чем значительно снижало частоту летальности [44; 64; 220; 132].
По мнению авторов [64; 220], белок влияет на дифференциацию, а не на пролиферацию лимфоидных клеток. Некоторые из этих эффектов связаны с тем, что белок как бы "убирает" клеточные остатки после облучения [132; 155; 220].
Связанный с беременностью альфа2-гликопротеин
В 1970 году Татаринов Ю.С. [53], а в дальнейшем Berne В.Н. [86], Bohn Н. [91], Никулина Д.М. и Трубников Г.А. [58] выявили СБАГ в сыворотке крови у больных с воспалительными заболеваниями и опухолевыми процессами, после чего СБАГ стали относить к белкам "острой фазы" [38].
Многие авторы относят СБАГ к группе неспецифических маркеров рака [5; 23; 25; 26; 85].
Afonso I. и Alvarez В. [68] в 1964 году первыми предположили, что усиление синтеза СБАГ является результатом повышения уровня эстрогенов и прогестерона. В дальнейшем, Bayer Н. и Kadach D. [83; 158], Klausch В. et al.
[161], Dunston G. et al. [118], подтвердили зависимость продукции этого белка от уровня эстрогенов.
Многими отечественными и зарубежными исследователями была доказана роль СБАГ в патогенезе аутоиммунных заболеваний [84].
Доказано повышение уровня СБАГ в сыворотке крови небеременных женщин, принимавших лечебные гормональные препараты, а также оральные контрацептивы [26; 45; 190].
В 1990 году было показано, что стероидные половые гормоны не обнаруживают стимулирующих свойств на биосинтез СБАГ [23; 101].
Трофобластический бета-глобулин
В настоящее время тесты на ТБГ широко применяются для ранней диагностики беременности [40; 48] и для диагностики патологических осложнений беременности [57; 157; 175; 191; 209].
По данным Никулиной Д.М. и соавт. [39] при поздних токсикозах беременности уровень ТБГ снижается, причем уменьшение концентрации белка прямо пропорционально тяжести токсикоза.
По мнению Посисеевой Л.В. и соавт. [43], наиболее неблагоприятно для прогноза перинатальной патологии резкое понижение уровня ТБГ в 29-36 недель и повышение в 37-40 недель беременности.
Уровень сывороточного ТБГ может служить косвенным ориентиром состояния плода. Некоторые авторы [36; 175; 157; 191] отмечают, что при внутриутробной гибели плода, угрожающем выкидыше и неразвивающейся беременности наблюдается быстрое падение уровня ТБГ в сыворотке крови.
В 1974 году Татаринов Ю.С., Меснянкина Н.В. и Никулина Д.М. [56; 57] обнаружили ТБГ в больших количествах в сыворотке крови больных пузырным заносом и хорионэпителиомой. Причем прослеживалась четкая прямая зависимость сывороточной концентрации ТБГ от стадии и распространенности процесса. Концентрация сывороточного ТБГ при хорионэпителиоме была значительно выше, чем при пузырном заносе. Никулиной Д.М. и соавт.[37] разра-
ботаны иммунохимические тесты для клинической диагностики трофобластных и некоторых других опухолей. В настоящее время эти тесты широко применяются в клинической диагностике [38].
Никулиной Д.М. и Воробьевой Т.Б. разработан также дифферинциаль-но-диагностический тест на переношенную и пролонгированную беременность [37; 17].
По данным Воробьевой Т.Б. [17] и Fialova L. et al. [113] уровень ТБГ в сыворотке крови и амниотической жидкости снижается после 42-й недели беременности (в сыворотке крови - с 0,16 до 0,12 г/л), что может служить диагностическим и прогностическим подспорьем при переношенной беременности.
1.4 СОВРЕМЕННЫЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЯ О ЛОКАЛИЗАЦИИ И МЕСТЕ СИНТЕЗА БЕЛКОВ БЕРЕМЕННОСТИ
В 1971 году Татаринов Ю.С. и соавт. [50; 52] и Bohn Н. [93], опираясь на результаты иммунохимических исследований, предположили, что синтез ТБГ осуществляется в плаценте.
В 1976 году Афанасьева А.В. и соавт. [4], методами непрямой имму-нофлюоресценции и иммуноавторадиографии показали, что синтез ТБГ происходит в цитоплазме клеток Лангганса и протоплазме хорионального синцития, что позволяет считать ТБГ абсолютным маркером беременности [4; 19].
Биологическая роль ТБГ, в настоящее время, неизвестна. По данным Bohn Н. [93], в результате проведения гормонального теста на инфантильных крысах, не было выявлено действия ТБГ на матку, яичники, семенники, семенные пузырьки, простату, надпочечники, щитовидную железу и тимус.
Bohn Н. [91] считает, что местом синтеза СБАГ является печень. Однако исследования Home et al. [147] показали, что СБАГ синтезируется в эстрогенза-висимых лейкоцитах, источником его являются моноциты и Т-лимфоциты.
Thomson et Home [151], Lundgren E. et al. (1979) установили, что этот
белок может синтезироваться и В-лимфоцитами и сорбироваться мембранами
клеток печени.
В дальнейшем Home et al. [147], Chowdhiry et al. [101] показали, что местом синтеза СБАГ являются также плазматические клетки.
Биологическое значение СБАГ остается недостаточно изученным. Предположение, что он может быть средством транспорта для эстрогенов [83; 158; 161] было опровергнуто Hofmann R. et al. [144] методами радиоиммуполо-гического исследования.
Schoutz В. et al. [215], изучая СБАГ на ФГА-стимулированной лимфо-цитарной культуре, пришли к выводу, что данный белок обладает иммуносу-прессивной активностью. Иммуносупрессивные свойства СБАГ были подтверждены в опытах in vivo и in vitro [32; 212].
Home C.H.W. et al. [118; 148], lames [152] считают, что СБАГ участвует в регуляции местных иммунных реакций в клетках слизистой, а также обладает выраженными иммуносупрессивными свойствами по отношению к различным звеньям иммунной системы.
Мальцева Н.В. и соавт. [32] проводили сравнительные исследования иммуносупрессивных свойств СБАГ по отношению к лимфоцитам беременных женщин. Исследования показали, что в первом триместре беременности иммуносупрессивное действие СБАГ на клетки было максимально выраженным, во втором триместре иммуносупрессивные свойства СБАГ выражены в меньшей степени, а в третьем триместре - в еще меньшей.
После того, как была обнаружена способность СБАГ образовывать комплексы с протеиназами и менять их ферментативную активность, Sand et а1.,в 1985 году [26], а затем Gliemann et al. (1986) и другие стали относить СБАГ к группе так называемых "ингибиторов протеиназ".
В 1992 году Christensen U. et al. [105] предложили модель механизма реакции связывания СБАГ с протеиназами, включающую четыре этапа:
1. расщепление участка затравки СБАГ-димеров энзимом.
2. быстрая связь энзим-СБАГ (димерных) видов с нативным СБАГ
или другими энзим-СБАГ (димерами), приводящая к высвобождению одной из
связанных молекул энзима.
3. реакция трех тиоловых эфиров промежуточного продукта энзим-
СБАГ (тетрамера) со связанной внутренней молекулой энзима или с внешней
молекулой.
4. гидролиз последнего тиолового эфира и разрушение энзим-
СБАГ (тетрамерных) комплексов и образование фрагментов, некоторые из ко
торых имеют величину СБАГ (димера) со связанным энзимом.
Philip A. et al. [200] в 1994 году, показали, что СБАГ связывает трансформирующий рост фактор.
Установлено, что СБАГ не связывает стероиды и не связывает и не стимулирует продукцию простогландинов (Damber М, 1977).
Petersen СМ. et al., в 1988 году [197], показали, что гепатоциты человека обладают рецепторами для комплексов СБАГ-протеиназа. На основании данных цитохимического анализа они сделали вывод, что гепатоциты играют ведущую роль при удалении комплексов СБАГ-протеиназа.
Birkenmeier G. et al., в 1989 году [87], изучали гидрофобные свойства СБАГ методом аффинно-фазовой хроматографии. Исследования показали, что обработка СБАГ химотрипсином значительно повышала поверхностную гид-рофобность по сравнению с гидрофобностью нативного белка. Не обнаружено различий в гидрофобном взаимодействии между нативным и обработанным метиламином СБАГ [87].
МГ (как и СБАГ) обладает выраженной антипротеазной активностью. Связывание протеиназ осуществляется определенным фрагментом субъединицы МГ, не затрагивая каталитически активного центра фермента. [210; 74; 76].
Полагают, что биологическая функция МГ заключается в сохранении связанного с ним плазмина от аутолиза и инактивирующего действия других ингибиторов протеиназ крови [242; 184; 73]. МГ является одним из ингибиторов свертывания, обеспечивая около 25% антитромбинного потенциала плазмы крови [1; 28]. Другие сериновые протеиназы гемостаза (12-а,9-а,7-а факторы) с МГ не взаимодействуют [226].
МГ полностью подавляет биологическую активность калликреина плазмы [137; 174].
Синтез и секреция МГ осуществляются, в основном, гепатоцитами человека, начиная с 29-30-го дня внутриутробного развития [133], на протяжении всей жизни [23; 133; 185; 187]. Кроме того, МГ синтезируется и секретируется лимфоидными клетками, моноцитами, макрофагами [154]. В-лимфоциты также могут синтезировать МГ, но не выделяют его в среду [244].
Физиологическое значение МГ многогранно. МГ нельзя назвать ингибитором протеиназ в полном смысле этого слова, так как он ингибирует проте-олитическую способность протеиназ в отношении высокомолекулярных белков, сохраняя в то же время активность фермента в отношении пептидов и низкомолекулярных синтетических субстратов [135; 249]. Поэтому предпочтительнее назвать МГ не ингибитором, а ограничителем - "рестриктором" ферментативных функций протеиназ [249].
Свойство белка превращать протеиназы в пептидазы, гидролизующие низкомолекулярные токсические пептиды, вероятно, имеет определенное значение в защите организма от бактериальной инфекции [121].
Одной из предполагаемых функций белка является удаление активированных ферментов протеолиза [15; 133; 226; 249]. Комплексы МГ с плазмином, тромбином, трипсином и другими протеиназами, исчезают из кровообращения значительно быстрее, чем свободный МГ [90]. Период полураспада комплекса МГ-протеиназа невелик (30 мин.) [138; 88].
Описана способность МГ образовывать комплексы с цинком [66].
Доказано, что МГ обладает иммуносупрессивными свойствами по отношению к различным звеньям иммунной системы [148; 152]. Наиболее сильно выражено иммуносупрессивное действие белка по отношению к лимфоцитам в течение беременности, особенно в первом триместре [32].
МГ влияет на способность нейтрофилов и макрофагов мигрировать в участки воспаления [155].